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微生态活菌总论上


录入时间:2010-8-26 17:00:43 来源中国药典2010版第三部

微生态活菌总论
微生态活菌制品系由人体正常菌群成员或具有促进正常菌群生长和活性作用的无害外籍细菌经培养收集菌体干燥成菌粉后加入?#23460;?#36741;料混合制成用于预防和治疗因菌群失调引起的相关症状?#22270;?#30149;
微生态活菌制品必须由非致病的活菌组成无论在生产过程制品贮存和使用期间均应保持稳定的活菌状态它可由一株多株或几种细菌制成单价或多价联合制剂根据其不同的使用途径和方法可制备成片剂胶囊剂颗粒剂或散剂等多种剂型
基本要求
微生态活菌制品的制备方法工艺应能保证成品含有足够的活菌数量保?#21046;?#31283;定性同时应防止外源因子的污染
生产?#22270;?#23450;用设施原材料及辅料水器具动物等应符合凡例的有关要求
制造
生产用菌种
生产用菌种应符合生物制品生产检定用菌毒种管理规定的有关规定
1.       名称及来源
选用的生产用菌种应来自人体内正常菌?#28023;?#25110;对人体无毒无害具有促进正常菌群生长和活性作用的外籍细菌细菌的分离过程和传代背景应清晰应具备稳定的生物学和遗传学特性并能保持稳定的活菌状态经实验室和临床试验证明安全?#34892;?/DIV>
2.       种子批的建立
菌种的属种型分类鉴定应依据最新版伯杰氏细菌系统鉴定?#26893;ᣨBergrys Manual of Systematic Bacteriology和伯杰氏细菌命名?#26893;ᣨBergrys Manual of Determinative Bacteriology的有关规定进行包括形态生长代谢特性检查原始种子或主种子还应做遗传特性和抗生素敏?#34892;?#31561;检查
三级种子批常规检查包括以下3项
1培养特性及染色镜检    将菌种接种于?#23460;?#22521;养基置有氧或厌氧环境中培养观察其生长情况确定菌种为需氧性细菌或厌氧性细菌以划线法观察在琼脂平皿上生长的单个菌落的形状大小表面边缘透明度色泽等特征也可观察菌种在不同温度pH或不同浓度的氯化钠溶液等条件下的生长特性等
取菌种的新鲜培养物涂片做革兰氏染色在显微镜下观察菌体的染色反应形态大小和排列等有芽孢的细菌应同时观察芽孢的形状大小和位置也可增做芽孢染色检查结果均应符?#26174;?#22987;菌种的特性
2生化反应    按附录细菌生化反应培养基选择相应的培养基或其他?#23460;?#30340;方法进行结果应符?#26174;?#22987;菌种的特性
3毒性试验    毒性试验是通过动物试验检查菌种是否存在不安全因素?#21592;?#35777;人体使用安全
用体重1822g小鼠5只每只腹腔注射0.3ml新鲜菌?#28023;?#19981;少于1.0109CFU/0.3ml,连续观察3天小鼠均应健康存活体重增加或每只小鼠经口灌胃0.5ml新鲜菌?#28023;?#19981;少于1.0109CFU/0.5ml每天1次连续3天从第1天灌胃起连续观察至第7天小鼠均应健康存活体重增加
除另有规定外原始种子或主种子批还需进行以下检查
1细菌代谢产物脂肪酸测定    照气相色谱法附录 ã或其他?#23460;?#30340;方法进行应符?#32454;?#33740;种的特性
2遗传特性分析    可采用细菌DNA的G+Cmol%的含量测定或其他?#23460;?#26041;法进行应符?#32454;?#33740;种的遗传特性
3抗生素敏?#34892;?#35797;验   采用琼脂扩散纸片法或其他?#23460;?#26041;法进行菌株的抗生素敏?#34892;?#26816;查应符?#32454;?#33740;种的特性
4稳定性试验    菌种在?#23460;?#22521;养基中连续传代30代次后将第30代培养物作种子批检定全部检查结果应与原始菌种的特性一致
4.种子批的保存
原始种子和主种子应冻干保存于8以下工作种子应置于?#23460;?#28201;度保存
菌粉制造
应包括种子液制备大罐培养收获菌体或芽孢和菌体干燥制成菌粉如生产多价制品时应每种菌分别培养制备单价菌粉
1.       生产用种子
启开工作种子批菌种接种于?#23460;?#22521;养基进行多级种子扩增应涂片做革兰氏染色在显微镜下观察510个视野细菌的染色反应形态应一致并符?#26174;?#22987;菌种的特征制备过程应防止污染菌种传代?#38382;?#24212;符合规定
2.    生产用培养基
采用经批准的培养基用于生产
3.       培养
采用液体培养将种子液?#27308;室?#26465;件下培养包括厌氧或需氧温度时间等培养过程中取样涂片做革兰氏染色镜检pH值检测等芽孢菌需进行芽孢形成率的检测均应符合规定培养结束后取样做纯菌检查如发?#27835;?#26579;应予废弃
生产多价制品的单价菌粉时应分别培养
4.       收获菌体和制成菌粉
培养结束后离心收获湿菌体与?#23460;?#30340;分散剂稳定剂混合采用真空冷冻干燥法干燥菌体芽孢菌可采用加热干燥方法再经粉碎过筛制成粉末状菌粉
5.       菌粉的保存及?#34892;?#26399;
应通过活菌稳定性试验确定保存温度和?#34892;?#26399;
6.       菌粉检定
按菌粉检定项进行符合规定后方可进行半成品配制
半成品
1.       配制
同一工作种子批菌种生产的最多2批单价菌粉可按批准的比例与辅料混合均?#32676;?#21046;成半成品配制多价制品时应将各单价菌粉辅料按配方比例和配制程序混合均匀配制过程应防止污染
2.       半成品检定
按半成品检定项进行应符合规定
成品
1.       剂型制备
根据制品的用途使用对象和用药途径等因素确定剂型制备过程应符?#32454;?#24405;制剂通则项下相关剂型的规定
2.    分批
成品批号应在半成品配制后确定配制日期即为生产日期同一批号的制品应来源一致质量均一按规定要求抽样检验后能对整批制品作出评定应根据验证结果规定半成品的分装时间如超过24小时应分为不同的亚批
3.       分装规格和包装
制品的分装应符?#32454;?#24405;制剂通则的有关规定包装应符合生物制品包装规程的有关规定规格应符合批准的规格要求
检定
微生态活菌制品质量检定应包括菌粉检定半成品检定和成品检定
菌粉检定
1.外观
应为白色灰白色或?#19968;?#33394;粉末
2.目的菌检查
取少量菌粉加入适量灭菌生理氯化钠溶液或其他?#23460;?#31232;释液后涂布在?#23460;?#29756;脂平皿上在?#23460;?#26465;件下培养其培养物的生长特性和染色镜检的特征应符合生产用菌种特征
3.杂菌检查
方法和结果判断见本总论附录3如不符合规定应废弃
4.干燥失重
菌粉中残余水分的含量会直接影响活菌的生存须进行菌粉干燥失重的检查应按附录 或仪器方法测定
5.活菌数测定
测定每克菌粉中含有的活菌数量方法见本总论附录2
半成品检定
半成品须做杂菌检查根据用药途径确定杂菌检查的质控指标方法和结果判断见本总论附录3
成品检定
1.       鉴别试验
检查成品中所含的目的菌是否符合生产用菌种的特性即按上述种子批的检定方法进行生长特性染色镜检和生化反应检查应符合规定对于多价制品则须逐一检查单价菌特性
2.        理化检查
1       外观  根据剂型观察制品的外观色泽
片剂外观应完整光洁呈白色或类白色间有菌粉色斑颗粒剂散剂和胶囊剂内粉末的粒子大小色泽应均匀间有菌粉色斑
2干燥失重  按附录 或仪器方法测定减失重量应不得超过5.0%芽孢菌制品应不得超过7.0%
3粒度  散剂和颗粒剂应进行粒度检查
     按附录第二法采用单筛分法或双筛分法检查应符合规定
4装量重量差异  各剂型按附录制剂通则的相应规定进行应符合规定
5崩解时限  胶囊剂片剂按附录进行应符合规定
3.活菌数测定
按本总论附录2方法测定每克制品中的活菌数应符合规定多价制品应分别测定各单价活菌数
4.杂菌检查
目的是检查成品?#22411;?#28304;微生物的污染情况?#21592;?#35777;人体使用安全
方法和结果判断与半成品的杂菌检查项相同
5.安全试验
安全试验是通过动物试验进行的非特异性毒性检查应根据制品的使用途径和人用剂量确定试验方法
1肠道微生态活菌制品检查  称取2g制品加入8ml生理氯化钠溶液中混合均?#21462;?#29992;5只体重1822g小鼠每只小鼠经口灌胃0.5ml每天1次连续3天自第1天灌胃起连续观察7天小鼠应健康存活体重增加判为?#32454;?#22914;不?#32454;?#21487;另选10只小鼠复试1次判定标准同前
2阴道微生态活菌制品检查  用2426g雌性小鼠5只每只小鼠阴道内置入10mg制品每天1次连续3天自给药第一天起连续观察7天小鼠应健康存活体重增加阴道?#26893;?#26080;红肿分泌物等症状判为?#32454;?/DIV>
保存运输及?#34892;?#26399;
按批准的温度保存和运输自生产之日起按批准的?#34892;?#26399;执行

 

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