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管碟法测定抗生素效价


录入时间:2011-6-24 9:40:59 来源互联网

 
 
一目的和要求 
 
1. 了解管碟法的原理
 
2. 掌握二剂量法测定抗生素效价单位的技术?#22270;?#31639;方法
 
二原理
 
抗生素的生物检定是以抗生素对微生物的抗菌效力作为效价的衡量标准具有与应用原理相一致用量少和灵敏度高等优点管碟法是琼脂扩散法中的一种已被各国药典广泛采用作为法定的抗生素生物检定方法
 
当抗生素在菌层培养基中扩散时会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度即扩散中心浓度高而边缘浓度低因此当抗生素浓度达到或高于MIC最低抑制浓度时试验菌就被抑制而不能繁?#24120;?#20174;而?#27663;?#36879;明的抑菌圈根据扩散定律的推导抗生素总量的对数值与抑菌圈?#26412;?#30340;平方?#19978;?#24615;关系
 
三实验材料
 
1. 四环素类抗生素的标准品和样品
 
2. 试验菌藤黄八叠球菌Sarcina lutea
 
3. 培养基250ml三角瓶分装150ml LB琼脂150ml三角瓶分装50ml LB琼脂50ml三角瓶分装20ml藤黄八叠球菌悬液用培养液
 
4. 灭菌物品培养皿牛津杯内径6.00.1mm外径7.80.1mm高度10.00.1mm滴管1ml吸管pH6.0的磷酸缓冲?#28023;?#24367;头镊子15150mm试管瓦盖
 
5. 其它分析天平容量瓶玻璃板水平仪游标卡尺
 
四实验实施
 
1. 配制标准品溶液
 
2. 配制样品溶液
 
3. 制备菌悬液
 
4. 制备平板
 
1取6套无菌培养皿分别加入约20mlLB培养基后置水平玻璃板上凝固作为底层
 
2另取冷却至50左右的50ml LB培养基加入1ml试验菌悬?#28023;?#36805;速摇?#32676;?#29992;10ml破口吸管取6ml混菌培养基倒在底层平板上作为菌层并放置在水平玻璃板上凝固
 
5. 在培养基平板底部作好相应标记用弯头镊子在每个培养皿中等距离放入4个牛津杯
 
6. 用滴管分别将高低浓度的标准品和样品溶液加入到牛津杯中以滴满为度换上皿盖
 
7. 将培养皿平?#20154;?#20837;恒温箱37下培养1618h
 
8. 用游标卡尺测量抑菌圈?#26412;?/DIV>

 

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