微生物技术资料
文章检索
  首页 > 微生物知识->中国药典微生物检测->抑菌效力检查法-2015中国药典

抑菌效力检查法-2015中国药典


录入时间:2014-9-16 9:44:02 来源国家药典委员会

       抑菌剂是指抑制微生物生长的化学物质有时也?#21697;?#33104;剂抑菌效力检查法 系用于测定灭菌及非灭菌制剂的抑菌活性?#20113;?#20215;最终产品的抑菌效力同时也 可用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌剂浓度的确定

      如果药物本身不具有充分的抗菌效力那么应根据制剂特性如水溶性制剂添加?#23460;?#30340;抑菌剂以防止制剂在正常贮藏或使用过程中可能发生的微生物污染和繁殖使药物变?#35782;?#23545;使用者造成危害尤其是多剂量包装的制剂

     在药品生产过程中抑菌剂不能用于替代药品生产的GMP 管理不能作为 非无菌制剂?#26723;?#24494;生物污染的唯一途径也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物负载的手段所有抑菌剂都具有?#27426;?#30340;毒性制剂中抑菌剂的量应为最低有效量同时为保证用药安全成品制剂中的抑菌剂有效浓度应低于对人体有害的浓度抑菌剂的抗菌效力在贮存过程中有可能因药物的成分或包装容器等因素影 响而变化因此应验证成品制剂中的抑菌剂效力在效期内不因贮藏条件而?#26723;?

本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂

培养基

培养基的制备

胰酪大豆胨液体培养基胰酪大豆胨琼脂培养基沙氏葡萄糖液体培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基?? 照无菌检查法通则 1101制备

培养基的适用性检查

抑菌效力测定用培养基应进行培养基的适用性检查包括成品培养基由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查

菌种 试验所用的菌株传代?#38382;?#19981;得超过 5 代从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0 代并采用?#23460;?#30340;菌种保藏技术进行保存?#21592;?#35777;试验菌株的生物学特性培养基适用性检查的菌种及新鲜菌体培养见表1

表 1 培养基适用性检查方法适用性试验抑菌效力测定用的试验菌培养条件

试验菌株

试验培养基

培养温度

培养时间

金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus aureus)CMCC(B)26 003

胰酪大豆胨琼脂
培养基或胰酪大
豆胨液体培养基

3035

1824小时

铜绿假单胞菌
(Pseudomonas
aeruginosa
CMCC(B)10 104

胰酪大豆胨琼脂
培养基或胰酪大
豆胨液体培养基

3035

1824小时

大肠埃希菌
(Escherichia coli)
CMCC(B)44 102

胰酪大豆胨琼脂
培养基或胰酪大
豆胨液体培养基

3035

1824小时

白色念珠菌
(Candida albicans)
CMCC(F) 98 001

沙氏葡萄糖琼脂
培养基或沙氏葡
萄糖液体培养基

2025

24-48小时

黑曲霉
(Aspergillus niger)
CMCC(F) 98 003

沙氏葡萄糖琼脂
培养基或沙氏葡
萄糖液体培养基

2025

57天或直到
获得丰富的孢

菌液制备 取表 1 大肠埃希菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌的新鲜培养物用pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成?#23460;?#27987;度的菌悬液取表2 黑曲霉的新鲜培养物加入35ml 含0.05ml/ml聚山梨酯80 的pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶?#28023;?#23558;孢子洗脱然后采用?#23460;?#26041;法吸出孢?#26377;?#28082;至无菌试管内用含0.05ml/ml聚山梨酯80 的0.9%无菌氯化钠溶液制成?#23460;?#27987;度的孢?#26377;?#28082; 菌液制备后若在室温下放置应在2 小时内使用若保存在28棬可在24 小时内使用黑曲霉孢?#26377;?#28082;可保存在28棬在验证过的贮存期内使用

适用性检查 分别接?#26893;?#22823;于 100cfu 的大肠埃希菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌的菌液至胰酪胨大豆琼脂培养基每株试验菌平行制备2 个平皿混匀凝固置3035培养不超过3 天计数分别接?#26893;?#22823;于100cfu 的白色念珠菌黑曲霉的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基每株试验菌平行制备2 个平皿混匀凝固置2025培养不超过5 天计数同时用对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验

结果判定 若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上菌落平均数的70%且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致判该培养基的适用性检查符合规定

抑菌效力测定

菌种 抑菌效力测定用菌种见表 1若需要制剂中常见的污染微生物也可作为试验菌株

菌液制备 新鲜菌体培养见表 1铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌大肠 埃希菌白色念珠菌若为琼脂培养物加入适量的0.9%无菌氯化钠溶?#33322;?#29756;脂 表面的培养物洗脱并将菌悬液移至无菌试管内 然后用 0.9%无菌氯化钠溶液冲?#24202;?#21046;成每1ml 含菌数约为108cfu 的菌悬?#28023;?#33509;为液体培养物离心收集菌体用0.9%无菌氯化钠溶液冲?#24202;?#21046;成每1ml 含菌数约为108cfu 的菌悬液取黑曲霉的新鲜培养物加入35ml 含0.05ml/ml聚山梨酯80 的0.9%无菌氯化钠溶?#28023;?#23558;孢子洗脱然后用?#23460;?#26041;法吸出孢?#26377;?#28082;至无菌试管内加入适量的含0.05ml/ml聚山梨酯80 的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含孢子数108cfu 的孢?#26377;?#28082;测定1ml 菌悬液中所含的菌数

菌液制备后若在室温下放置应在 2 小时内使用若保存在28棬可在24 小时内使用黑曲霉的孢?#26377;?#28082;可保存在28棬在1 周内使用

供试?#26041;?#31181; 抑菌效力可能受试验用容器特征的影响如容器的材质形状体积及封口的方式等因此只要供试品每个包装容器的装量足够试验用同时容器便于?#27425;?#33740;操作技术接入试验菌液混合及取样等一般应将试验菌直接接种于供试品原包装容器中进行贮存若因供试品的性状或每个容器装量等因素需将供试品转移至无菌容器时该容器的材质不得影响供试品的特性如吸附作用特别应注意不得影响供试品的pHpH 对抑菌剂的活性影响很大同时容器的口径大小应便于供试品的转移及混?#21462;?#21462;包装完整的供试品至少 5 份直接接种试验菌或取适量供试品分别转移至5 个?#23460;?#30340;无菌容器中若试验菌株数超过5 株应增加相应的供试品份数每一容器接种一种试验菌 1g 或1ml 供试品中接菌量为105106cfu接种菌液的体积不得超过供试品体积的1%,充分混合使供试品中的试验菌均?#30830;植E?#28982;后置2025避光贮存

存活菌数测定 根据产品类型按表2-1表2-2表2-3 规定的间隔时间分别从上述每个容器中取供试品1ml(g)测定每份供试品中所含的菌数测定细菌用胰酪胨大豆琼脂培养基测定真菌用沙氏葡萄糖琼脂培养基存活菌数测定方法及方法适用性试验照非无菌产品微生物限度检查微生物计数法通则1105进行方法适用性试验用菌株见表1菌液制备同培养基适用性检查方法适用性试验试验菌的回?#31456;什?#24471;低于70%根据存活菌数测定结果计算1ml(g)供试品各试验菌所加的菌数及各间隔时间的菌数并换算成lg 值试验结果按有效数字的修约规则进舍保留小数点后1 位有效数字结果判断 供试品抑菌效力评价标?#25216;?#34920; 2-1表2-2表2-3表中的减少的lg 值是指各间隔时间测定的菌数lg 值与1ml(g)供试品中接种的菌数lg 值的相差值表中A是指应达到的抑菌效力标准特殊情况下如抑菌剂可能增加不良反应的风险那至少应达B的抑菌效力标准

表2-1 注射剂和眼用制剂抑菌效力判断标准

 

 

减少的lg值

 

 

6h

24h

7d

14d

28d

细菌

A

2

3

-

-

NR

 

B

-

1

3

-

NI

真菌

A

-

-

2

-

NI

 

B

-

-

-

1

NI

 

NR试验菌未恢复生长
NI?#20309;?#22686;加是指对前一个测定时间试验菌增加的数量不超过0.5 lg

表2 -2 ?#26893;?#32473;药制剂抑菌效力判断标准

 

 

 减少的lg值

 

 

 

 2d

 7d

14d 

 28d

 

 细菌


2

3

-

 NR

 

 


-

-

3

 NI

 

 真菌


-

-

2

 NI

 

 


-

 -

1

 NI

 

NI?#20309;?#22686;加是指对前一个测定时间试验菌增加的数量不超过0.5 lg

表2 -3 口服制剂抑菌效力判断标准

 

减少的lg值

 

14d

28d

细菌

3

NI

真菌

1

NI

NI?#20309;?#22686;加是指对前一个测定时间试验菌增加的数量不超过0.5 lg

?#24471;?/span>

1. 抑菌剂效力检查法指导原则收载于中国药典一二三部附录中 内容一致

2.本稿是依据2010 年版抑菌剂效力检查法指导原则修订而成参照?#20998;?#33647;典对抑菌效力检查结果判断标准进行了修订

 

 

上一篇非无菌产品微生物限度检查微生物计数法-2015中国药典

下一篇非无菌药品微生物限度标准2015中国药典

相关文章:
2015年版药典抑菌剂效力检查法 药典微生物检验问题解答汇总-效价抑菌效力
?#26893;?#23450;抗菌药物最低抑菌浓度MIC方法 白色念珠菌抑菌剂效力测定
抑菌剂效力测定概述 抑菌效力测定-无菌检查法
抑菌剂效力检查中培养基的适用性检查 抑菌剂效力测定概述
抑菌剂效力检查法指导原则 抑菌剂效力测定
首页 | 关于我们 |网上商城| 加入收藏 | 在线客服 | 网?#38236;?#22270;| 联系我们
地址青岛市李沧区龙水路318号D座
电?#22467;?00-0532-596 0532-66087773
6608776281935169

传真0532-81935080 66087775

?#27663;䣺[email protected]

QQ:4000532596

投诉与建议
电?#22467;?3105190021 13006536294
?#27663;䣺[email protected]
©2001- 版权所有 青岛高科技工业园海博生物技术有限公司 鲁ICP备05018323号
Ӱ߾糡1
Ϻʱʱֲʾ λԪ vsƵֱ ظ ʱʱƷ ¼׶ɵ¶ ħ3ư ϶Ͷvsʼ Ǻ ᱦͷ