微生物技術資料
文章檢索
  首頁 > 微生物知識->細菌基本知識和檢測方法->大腸桿菌菌體蛋白質殘留量測定法(2015藥典)

大腸桿菌菌體蛋白質殘留量測定法(2015藥典)


錄入時間:2015-8-21 9:24:29 來源:青島海博生物

   本法系采用酶聯免疫法測定大腸桿菌表達系統生產的重組制品中菌體蛋白質殘留量。

   試劑(1)包被液(P H9.6碳酸鹽緩沖液) 稱取碳酸鈉0.32g、碳酸氫鈉0 .5 8 6 g ,置200ml量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度。

   (2 )磷酸鹽緩沖液(p H 7 . 4 )稱取氯化鈉8g、氯化鉀0.2g、磷酸氫二鈉1.44g、磷酸二氫鉀0.24g,加水溶解并稀釋至500ml, 121°C滅菌15分鐘。

   (3 )洗滌液(pH7.4) 量取聚山梨酯20 0.5ml,加磷酸鹽緩沖液至500ml。

   (4 )稀釋液(p H 7 . 4 )稱取牛血清白蛋白0.5g,加洗滌液溶解并稀釋至100ml。

   (5 )濃稀釋液稱取牛血清白蛋白l.O g , 加洗滌液溶解并稀釋至100ml。

   (6 )底物緩沖液(pH 5 .0枸櫞酸-磷酸鹽緩沖液) 稱取磷酸氫二鈉(Na2HP04 . 12H20 )1 . 84g、枸櫞酸 0. 51g,加水溶解并稀釋至100ml。

   (7 )底物液取鄰苯二胺8mg、30%過氧化氫30^1,溶于底物緩沖液20ml中。臨用時現配。

   (8 )終止液lm o l/L硫酸溶液。標準品溶液的制備按菌體蛋白質標準品說明書加水復溶,精密量取適量,用稀釋液稀釋成每lm l中含菌體蛋白質500ng、250ng、125ng、62. 5ng、31. 25ng、15. 625ng, 7. 8125ng的溶液。

   供試品溶液的制備 取供試品適量,用稀釋液稀釋成每lml中約含250μg的溶液。如供試品每lml中含量小于500μg時,用濃稀釋液稀釋1倍。

   測定法 取兔抗大腸桿菌菌體蛋白質抗體適量,用包被液溶解并稀釋成每lml中含10μg的溶液,以100μl/孔加至9 6孔酶標板內,4放置過夜(16〜18小時)。用洗滌液洗板3次;用洗滌液制備1%牛血清白蛋白溶液,以200μl/孔加至酶標板內,37放置2 小時;將封閉好的酶標板用洗滌液洗板3 次;以100μl/孔加人標準品溶液和供試品溶液,每個稀釋度做雙孔,同時加入2 孔空白對照(稀釋液),37°C放置2 小時;用稀釋液稀釋辣根過氧化物酶(HRP)標記的兔抗大腸桿菌菌體蛋白質抗體1000倍,以100μl/ 孔加至酶標板內,37°C放置1 小時,用洗滌液洗板1 0次,以lOOμl/

孔加人底物液,3 7 避光放置4 0 分鐘,以5 0 μl/孔加入終止液終止反應。用酶標儀在波長4 9 2 n m 處測定吸光度,應用計算機分析軟件進行讀數和數據分析,也可使用手工作圖法計算。

   以標準品溶液吸光度對其相應的濃度作標準曲線,并以供試品溶液吸光度在標準曲線上得到相應菌體蛋白質含量,

按以下公式計算:

   供試品菌體蛋白質殘留量(%) = c×n)/(T×106)×100

式中  c為供試品溶液中菌體蛋白質含量,ng/ml;

      n為供試品稀釋倍數;

      T為供試品蛋白質含量,mg/ml。

注:也可采用經驗證的酶聯免疫試劑盒進行測定。

 

上一篇:細胞支原體污染的影響

下一篇:致瀉大腸埃希氏菌檢驗(征求意見稿)(二)

相關文章:
致瀉大腸埃希氏菌檢驗(征求意見稿)(二) 致瀉大腸埃希氏菌檢驗(征求意見稿)(一)
食品微生物學檢驗 大腸菌群計數 征求意見稿 十張圖帶你讀懂大腸桿菌
大腸菌群MPN的概念及意義 食品衛生微生物學檢驗大腸菌群的快速檢測
大腸桿菌菌體蛋白質殘留量測定法 沙門氏菌、志賀氏菌和致瀉大腸埃希氏菌的腸桿菌科噬菌體診斷檢驗
大腸菌群衡量食品污染的依據 游泳池水微生物檢驗標準-大腸菌群測定
首頁 | 關于我們 | 網上商城 | 加入收藏 | 在線客服 | 網站地圖| 聯系我們
地址:青島市李滄區龍水路318號D座
電話:400-0532-596 0532-66087773
66087762、81935169

傳真:0532-81935080 66087775

郵箱:[email protected]

QQ:4000532596

投訴與建議
電話:13105190021 13006536294
郵箱:[email protected]
©2001- 版權所有 青島高科技工業園海博生物技術有限公司 魯ICP備05018323號
火影忍者剧场版1
pk10历史单双最高记录 历来双色球中奖号码 云南时时开奖数据 福建十一选五开奖 天津快乐十分彩票兑奖中心地址 彩票计划群 11选5上海时时平台 沙巴体育365 北京赛车pk搜狐 赌博极速赛车靠谱吗