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霉菌和酵母计数征求意见稿


录入时间:2016-3-8 16:17:37 来源青岛海博生物

1  范围

    本标准规定了食品中霉菌和酵母moulds and yeasts的计数方法

    本标准适用于各类食品中霉菌和酵母的计数

2  设备和材料

除微生物实验?#39029;?#35268;灭菌及培养设备外其他设备和材料如下

2.1  培养箱21 

2.2  拍击式均质器及均质袋

2.3  电子天平感量0.1 g

2.4  无菌锥形瓶容量500 mL

2.5  无菌吸管1 mL(0.01 mL刻度)10 mL(0.1 mL刻度)

2.6  无菌试管: 18 mm180 mm

2.7  旋涡混合仪

2.8  无菌平皿?#26412;?/span>90 mm

2.9  恒温水浴箱46 

2.10  显微镜10

3  培养基和试剂

3.1  生理盐水见附录AA.1

3.2  马铃薯葡萄糖琼脂见附录AA.2

3.3  孟加拉红琼脂见附录AA.3

4  检验程序

5  操作步骤

5.1  样品的稀释

5.1.1  固体和半固体样品称取25 g样品加入225 mL稀释?#28023;?#27700;或生理盐水充分振摇或用拍击式均质器拍打2 min制成1:10的样品匀液

5.1.2  液体样品以无菌吸管吸取25 mL样品至盛有225 mL稀释?#28023;?#27700;或生理盐水的锥形瓶可在瓶内预?#27308;实?#25968;量的无菌玻璃珠或无菌均质袋中充分振摇或用拍击式均质器拍打2 min制成1:10的样品匀液

5.1.3  1 mL 1:10样品匀液注入含有9 mL无菌稀释液的试管中另换一支1 mL无菌吸管反复吹吸或在旋涡混合仪上混匀此液为1:100的样品匀

5.1.4  5.1.3操作程序制备10递增系列稀释样品匀液每递增稀释一次换用11 mL无菌吸管

5.1.5  根据对样品污染状况的估计选择23个?#23460;?#31232;释度的样品匀?#28023;?#28082;体样品可包括原?#28023;?#22312;进行10倍递增稀释的同时每个稀释度分别吸取1 mL样品匀液于2个无菌平皿内同时分别取1 mL无菌稀释液加入2个无菌平皿作空白对照

5.1.6  及时将20 mL25 mL冷却至46 的马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼脂可放置于46 1 恒温水浴箱中保温倾注平皿并转动平皿使其混合均?#21462;?/span>置水平台面待培养基完全凝固

5.2  培养

琼脂凝固后置平板21 培养箱中培养观察并记录培养至第5 d的结果

5.3  菌落计数

用肉眼观察必要时可用放大镜或低?#27602;?/span>记录稀释倍数和相应的霉菌和酵母菌落数以菌落形成单位colony-forming unitsCFU表示

选取菌落数在10 CFU150 CFU的平板根据菌落形态分别计数霉和酵母霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为菌落蔓延

6  结果与报告

6.1  结果

6.1.1计算同一稀释度的两个平板菌落数的平均值再将平均值乘以相应稀释倍数

6.1.2有两个稀释度平板上菌落数均10 CFU150 CFU之间按照GB 4789.2的相应规定进行计算

6.1.3  若所有平板上菌落数均大于150 CFU则对稀释度最高的平板进行计数其他平板可记录为多不可计结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算

6.1.4  若所有平板上菌落数均小于10 CFU则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算

6.1.5  若所有稀释度包括液体样品原?#28023;?#24179;板均无菌落生长则以小于1乘以最低稀释倍数计算

6.2  报告

6.2.1  菌落数按舍五入原则修约菌落数在10以内时采用一位?#34892;?#25968;字报告菌落数在10100之间采用两位?#34892;?#25968;字报告

6.2.2  菌落数大于或等于100时前第3位数?#26893;?#29992;四舍五入原则修约后取前2位数字后面用0代替位数来表示结果也可用10的指数?#38382;?#26469;表示此时也按四舍五入原则修约采用两位?#34892;?#25968;字

6.2.3若空白对照平板上有菌落出现则此次检测结果无效

6.2.4  称重取样以CFU/g为单位报告体积取样以CFU/mL为单位报告报告或分别报告霉菌和/或酵母数


附  录A

培养基和试剂

A.1  生理盐水

A.1.1  成分

      氯化钠                            8.5 g

      蒸馏水                           1 000 mL

A.1.2  制法

    氯化钠1000 mL蒸馏水搅拌至完全分装后121 灭菌20 min备用

A.2  马铃薯葡萄糖琼脂

A.2.1  成分

      马铃薯(去皮切块)                  300 g

      葡萄糖                           20.0 g

      琼脂                             20.0 g

      氯霉素                            0.1 g

      蒸馏水                           1 000 mL

A.2.2  制法

    将马铃薯去皮切块加1000 mL蒸馏水煮沸10 min20 min用?#24202;?#36807;滤补加蒸馏水至1000 mL加入葡萄糖和琼脂加热溶分装后121 灭菌20 min备用

A.3  孟加拉红琼脂

A.3.1  成分

      蛋白胨                            5.0 g 

      葡萄糖                            10.0 g

      磷酸二氢钾                        1.0 g

      硫酸镁无水                    0.5 g

      琼脂                              20.0 g

      孟加拉红                          0.033 g

      氯霉素                            0.1 g

蒸馏水                            1 000 mL

A.3.2  制法

上述各成分加入蒸馏水中加热溶解补足蒸馏水至1 000 mL分装后121灭菌20 min避光保存备用


附  录B

霉菌直接镜检计数法

    常用的为郝氏Howard霉菌计测法本方法适用于番茄酱罐头番茄汁

B.1  设备和材料

B.1.1  折光仪

B.1.2  显微镜

B.1.3  郝氏计测玻片具有标准计测室的特制玻片

B.1.4  盖玻片

B.1.5  测微器具标准刻度的玻片

B.2  操作步骤

B.2.1  检样的制备取定量检样加蒸馏水稀释至折光指数为1.34471.3460即浓度为7.9%8.8%备用

B.2.2  显微镜标准视野的校正将显微镜按放大率90125倍调节标准视野使其?#26412;?#20026;1.382mm

B.2.3  涂片?#21512;缓?#27663;计测玻片将制好的标准?#28023;?#29992;玻璃棒均匀的摊布于计测室加盖玻片以备观察

B.2.4  观测将制好之载玻片于显微镜标准视野下进行观测般每一检样每人观察50个视野同一检样应由两人进行观察

B.2.5  结果与计算在标准视野下发现有霉菌菌丝其长度超过标准视野1.382 mm1/6或三根菌丝总长度超过标准视野的1/6?#24202;?#24494;器的一格时即记录为阳性否则记录为阴性

B.2.6  报告报告每100个视野全部阳性视野数为霉菌的视野百分数视野

 

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